pcr仪即基因扩增仪,主要是利用dna聚合酶对特定基因做体外或试管内in vitro的大量合成,用dna聚合酶进行专一性的连锁复制。根据dna扩增的目的和检测的标准可以将pcr仪分为普通pcr仪,梯度pcr仪,原位pcr,实时荧光定量pcr仪四大类。下面就来为大家一一介绍:
1.普通pcr仪
普通pcr仪是一次pcr扩增只能运行一个特定退火温度,如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行,主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
2.梯度pcr仪
梯度pcr仪是一次性pcr扩增可以设置一系列不同的退火温度条件。主要用于研究未知dna退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约经费。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的pcr用。
3.原位pcr仪
原位pcr仪是用于从细胞内靶dna的定位分析的细胞内基因扩增仪。可保持细胞或组织的完整性,使pcr反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶dna所在的位置进行基因扩增。对于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转变有着重大的实用价值。
4.实时荧光定量pcr仪
荧光定量pcr是在普通pcr仪基础上增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。主要应用于临床医学检测、食品行业、科研院校等。
pcr仪是一种利用dna聚合酶对特定基因做体外或试管内invitro的大量合成,基本上它是利用dna聚合酶进行专一性的连锁复制。因而,在pcr仪使用时对于环境要求很高,为了避免实验未完成前可能出现的任何污染反应液的情况,应该了解关于反应液受到污染时,反应液处理方法:
紫外照射法:未加模板和taq聚合酶的pcr混合液进行紫外照射,注意事项与方法同上述uv照射法;
内切酶法:选择识别4个碱基的内切酶(如msp i和taq i等),可同时选择几种,以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷,室温作用1h 后加热灭活进行pcr;
dnase i法:pcr混合液(未加模板和taq聚合酶)加入0.5u dnase i,室温反应30 min后加热灭活,然后加入模板和taq聚合酶进行正常pcr扩增。该方法的优点是不需要知道污染dna的序列;
g射线辐射法:1.5kgy的辐射可完全破坏0.1ng基因组dna,2.0 kgy可破坏104拷贝的质粒分子,4.0 kgy仍不影响pcr,但高于此限度会使pcr扩增效率下降。引物可受照射而不影响pcr,g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏dna的。
pcr仪的使用要求很高,因此不允许在实验过程中出现一丝错误,尤其是任何与实验有关的物品的污染情况。上述关于pcr仪反应液污染情况的及时处理方法一定能帮助您在实验中出现类似情况时及时处理。
实验室中使用的仪器一般都是很精密的,所以在使用的时候,也要对其进行保养维护,今天君意生物的小编就和大家一起来了解一下如何保养pcr仪:
1. 使用前预热
老款的pcr仪的性能比不上新款仪器,使用前需要进行预热,不仅对仪器维护有好处,还能节约实验时间。新款的仪器升温快,但还是建议能在进行实验前预热2min,这样可以有效延长仪器的使用寿命。
2. 定期运行维护
pcr仪器使用频率较低的情况下,需要在仪器关闭1小时后用软布或塑料纸覆盖以防止灰尘进入。仪器如果长期不使用,需要至少每隔半个月进行一次开机自检,运行20min左右。
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